小鼠结肠

产品信息

其他自备材料和试剂

MG&ABW基质胶

上皮类器官基础培养基  

类器官消化液  

润洗液

类器官冷冻保存培养基(无血清)  

DPBS (1X)，液体，不含钙和镁

小鼠结肠类器官complete medium培养基的制备

使用无菌操作技术配制小鼠结肠类器官的扩增或分化培养基。以配制 10 mL 为例配置小鼠结肠类器官扩增或分化培养基，

如所需量不同，可相应调整用量。

1. 冰上解冻 Mouse Colonic Organoid Supplement B (50x)，Mouse Colonic Organoid Supplement C (250x)和 Mouse

Colonic Organoid Supplement D (250x)。

2. 注意：各 Supplement 添加物解冻后，建议分别分装后保存取用，避免反复冻融。

3. 小鼠结肠类器官的扩增培养基：将 200 uL Mouse Colonic Organoid Supplement B (50x)，40 μL Mouse Colonic

Organoid Supplement C (250x) 和 40 μL Mouse Colonic Organoid Supplement D (250x) 加 至 9.72 mL Mouse

Colonic Organoid Basal Medium 中，充分混合，配制成 10 mL 小鼠结肠类器官扩增培养基。

4. 小鼠结肠类器官的分化培养基：将 200 μL Mouse Colonic Organoid Supplement B (50x)，40 μL Mouse Colonic

Organoid Supplement C (250x) 加至 9.76 mL Mouse Colonic Organoid Basal Medium 中，充分混合，配制成 10 mL

小鼠结肠类器官分化培养基。

5. 注意：配制后的小鼠结肠类器官扩增或分化培养基可在 2 - 8°C 储存 10 天。此外，Mouse Colonic Organoid

Supplement B(50x)内含有细菌及真菌抗生素(50x)。

8. 将接种完成后的培养板至于 37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育 15 min 左右待基质胶凝固后取出。

9. 配制小鼠结肠类器官扩增培养基。

10. 待基质胶凝固后，沿孔壁加入提前预热的小鼠结肠类器官扩增培养基，24 孔板每孔 500 μL。

11. 将 24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养，待新长出的类器官直径超过 100 μm 后可进行分化实验。

12. 分化前需要吸去 24 孔板培养孔中的小鼠结肠类器官扩增培养基，并加入 500 μL 提前配制的分化培养基，分化

通常需要 4 d 以上时间，分化期间每隔 2 d 更换一次分化培养基，分化完成后可进行后续实验。