matrigel基质胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出基底膜基质,其主要成分有层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白,还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。它会有色差变化(淡黄色到深红色),是由于酚红和碳酸氢盐与CO2的作用引起的,但是与5%CO2平衡后色差即会减少。
1、基质胶冻融操作:
收货后,若不立刻使用基质胶,应马上将仍然是冷冻固态的基质胶放进-20℃冰箱保存。使用前须先将基质胶冻融。
2、冻融:
将matrigel基质胶埋于铺满碎冰的冰盒中,然后将整冰盒放入4℃冰箱stayovernight溶解。(普通浓度的基质胶,溶解时间1-2天;高浓度基质胶溶解时间3-7天)。
3、分装:
溶解后的须分装保存,以避免反复冻融。液态基质胶,会在10℃以上快速成胶(特别是高浓度基质胶),因此,分装时,接触到基质胶的耗材必须预冷(如移液管、吸头、EP管等),并且整个实验必须无菌、冰上操作。(高浓度的基质胶比较粘稠,用移液器不好吸取,可以使用去掉针头的预冷注射器吸取。)
4、保存:
分装后的基质胶在冰上应仍然呈现液态,此时将基质胶放进-20℃保存即可。进行实验时,取出分装好的小管,4℃冻融。若分装好后基质胶已经凝固,说明分装操作不能很好地保持低温,导致基质胶已经成胶,不适宜使用。
5、普通浓度基质胶操作:
细胞可在0.5mm厚度的基质胶表面生长,可以在1mm厚度的三维基质内生长。过度稀释的基质胶会形成非胶质的蛋白层,可以用于细胞贴壁,但不能用于细胞的研究分化。为保证基质胶的成胶性能与稳定,稀释浓度不应低于1:3,可用预冷无血清培养基稀释,成胶后立即使用。